Đặt vấn đề: Đột biến JAK2 V617F là một trong những tiêu chí chính được sử dụng để chẩn đoán bệnh lý tăng sinh tuỷ ác tính (Myeloproliferative neoplasms - MPNs). Nghiên cứu này nhằm mục tiêu sau: (1) Thiết lập và so sánh các quy trình chẩn đoán đột biến V617F gene JAK2 bằng các kỹ thuật PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP; (2) Bước đầu xác định tỷ lệ đột biến V617F của gene JAK2 trong nhóm bệnh nhân tăng sinh tuỷ ác tính.

Đối tượng và phương pháp: Tách chiết DNA từ máu ngoại vi của 31 bệnh nhân được bác sĩ lâm sàng theo dõi chẩn đoán MPNs và 10 người khỏe mạnh. Xác định đột biến V617F gene JAK2 bằng kỹ thuật PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP. Giải trình tự Sanger ngẫu nhiên 15% mẫu để đối chiếu.

Kết quả: Nhiệt độ gắn mồi tối ưu cho phản ứng PCR đặc hiệu allele là 55^oC. Phản ứng cắt trong kỹ thuật PCR-RFLP sử dụng 300 ng sản phẩm PCR. Tất cả các mẫu được kiểm chứng bằng giải trình Sanger đều cho kết quả tương đồng. Có sự phù hợp hoàn toàn trong kết quả phát hiện đột biến giữa PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP.

Kết luận: Thiết lập được quy trình xác định đột biến JAK2 V617F bằng hai phương pháp PCR đặc hiệu allele và PCR-RFLP, trong đó kỹ thuật PCR đặc hiệu allele có nhiều ưu điểm hơn. Tỷ lệ đột biến V617F của gene JAK2 trong nhóm bệnh nhân là 61,3%.

Background: JAK2 V617F mutation is one of the major criteria in diagnosing MPNs. This study aimed to: (1) Establish a procedure and compare Allele specific-PCR and PCR-RFLP techniques in identifying JAK2 V617F mutation; (2) Primarily evaluate the prevalence of V617F mutation of JAK2 gene in patients with MPNs.

Materials and methods: DNA extraction was isolated from peripheral blood of 31 patients with MPNs followed by clinicians and 10 healthy individuals. Determining V617F mutation of JAK2 gene by AS-PCR and PCR-RFLP techniques. Sanger sequencing randomly 15% of samples for comparison. Results: The optimal annealing temperature for AS-PCR is 55^oC. Conditions of restriction digest in PCR-RFLP uses 300 ng of PCR product. All samples identified by AS-PCR and PCR-RFLP showed similar results.

Conclusion: Established a procedure to identify the V617F mutation in JAK2 gene by allele-specific PCR and PCR-RFLP, in which the AS-PCR technique showed more advantages. The frequency of V617F mutation of JAK2 gene in patients was 61.3%.