XÁC ĐỊNH ĐA HÌNH C677T TRÊN GENE MTHFR BẰNG KỸ THUẬT PCR-RFLP

Đặt vấn đề: Đa hình C677T trên gene MTHFR là một yếu tố nguy cơ của nhiều bệnh lý khác nhau. Đề tài được thực hiện nhằm các mục tiêu: (1) Hoàn thiện kỹ thuật PCR-RFLP với cặp mồi tự thiết kế để xác định đa hình C677T trên gene MTHFR. (2) Xác định tỷ lệ các đa hình tại vị trí 677 của gene MTHFR trên nhóm người tình nguyện. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Tách chiết DNA từ máu ngoại vi của 60 người tình nguyện. Thiết kế cặp mồi bằng phần mềm FastPCR và hoàn thiện kỹ thuật PCR. Chuẩn hóa phản ứng cắt bằng enzyme HinfI, kiểm chứng kết quả bằng phương pháp xác định trình tự. Kết quả: Đã thiết kế được cặp mồi cho phép khuếch đại đoạn gene MTHFR chứa vị trí đa hình 677 và luôn có một vị trí cắt bắt buộc (làm chứng nội). Phản ứng cắt chỉ cần dùng 0,5 µl HinfI (10 U/µl). Tỷ lệ 677CC là 71,67 %; 677CT là 25 %; 677TT là 3,33 %. Kết luận: Đã hoàn thiện thành công kỹ thuật PCR-RFLP để xác định đa hình C677T trên gene MTHFR. Từ khóa: đa hình C677T, gene MTHFR, PCR-RFLP

Background: The C677T polymorphism of MTHFR gene is a risk factor of many diseases. This study is aimed at: (1) Improving a PCR-RFLP process with the own designed primers to identify the C677T polymorphism of MTHFR gene. (2) Evaluating the prevalence of the C677T polymorphism of MTHFR gene in volunteer group. Materials and method: DNA samples was extracted from peripheral blood of 60 volunteers. Designing primers by using FastPCR software, then improving PCR technique. Standardizing the optimal conditions of restriction digest by HinfI. Confirming the results of polymorphism by DNA sequencing technique. Results: We designed successfully primers to amplify fragment of MTHFR gene including C677T polymorphism and an obligatory restriction site of HinfI (as internal control). 0.5 µl of HinfI enzyme (10 U/µl) is enough for restriction digest. The MTHFR genotype frequencies were: 71.67 % (677CC); 25% (677CT); and 3.33 % (677TT). Conclusion: We standardized successfully PCR-RFLP technique to identifying C677T polymorphism of MTHFR gene. Keywords: C677T polymorphism, MTHFR gene, PCR-RFLP